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安元生物科技（南京）有限公司
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安元生物科技（南京）有限公司
入驻年限：13 年
- 联系人：
陈先生
- 所在地区：
江苏 南京市
- 业务范围：
技术服务、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、耗材、试剂、原辅料包材、抗体
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公司新闻/正文
永生化小鼠树突状细胞mutudc1940应用案例与技术方案
91 人阅读发布时间：2025-11-15 22:56
一、产品概述
永生化小鼠树突状细胞（Immortalized Mouse Dendritic Cells, mutudc1940）是安元生物基于C57BL/6小鼠骨髓来源未成熟树突状细胞（BMDC），通过慢病毒介导hTERT（端粒酶逆转录酶）+ Bcl-2双基因转染技术建立的永生化细胞系。产品既保留了原代BMDC的核心功能（抗原提呈、T细胞激活），又突破了原代DC“易分化、传代有限”的瓶颈，具备高增殖稳定性（≥20代仍保持表型）、强抗原提呈能力（MHC I/II及共刺激分子高表达）、低自发激活倾向三大优势，是肿瘤免疫、疫苗研发及自身免疫病研究的黄金工具细胞。
核心生物学特性（P3代数据）：
- •
表型纯度：CD11c⁺（＞98%）、MHC II⁺（＞95%）、CD80⁺（＞90%）、CD86⁺（＞88%）、CD40⁺（＞85%）；
- •
功能活性：抗原摄取率（FITC-dextran）＞75%、T细胞激活率（CFSE稀释）＞60%；
- •
增殖能力：倍增时间≈24小时，P20代活力仍＞80%。
二、技术方案：标准化制备与全流程质控
安元生物mutudc1940严格遵循GLP标准生产，核心技术流程及质控要点如下：
1. 原代BMDC诱导与永生化
- •
骨髓分离：取C57BL/6小鼠股骨/胫骨，冲洗获取骨髓细胞，密度梯度离心（Ficoll-Paque）纯化单个核细胞；
- •
DC分化：用含GM-CSF（20 ng/mL）、IL-4（10 ng/mL）的RPMI-1640培养基诱导7天，获得未成熟BMDC；
- •
永生化处理：慢病毒载体转染hTERT+Bcl-2基因，嘌呤霉素筛选稳定株，命名mutudc1940。
2. 全流程质量控制
|
指标 |
检测方法 |
接收标准 |
|---|---|---|
|
细胞纯度 |
流式细胞术（CD11c⁺） |
＞98% |
|
表型稳定性 |
流式细胞术（MHC II/CD80/86） |
P5-P20代表达波动＜5% |
|
抗原提呈功能 |
OT-I/OT-II T细胞激活实验 |
IFN-γ分泌量较未负载组≥3倍 |
|
致瘤性 |
裸鼠成瘤实验（6周） |
无肿瘤形成 |
|
微生物安全性 |
支原体/细菌/真菌检测 |
均为阴性 |
三、实验案例与应用场景
案例1：肿瘤免疫——mutudc1940激活抗原特异性CTL的能力验证
背景：树突状细胞是肿瘤免疫的“哨兵”，其抗原提呈能力直接决定抗肿瘤T细胞应答强度。本研究验证mutudc1940负载肿瘤抗原后激活CD8⁺ CTL的效果。
实验设计：
- •
取mutudc1940（P5代）负载OVA特异性CTL表位肽（SIINFEKL），与OT-I小鼠脾脏CD8⁺ T细胞共培养（效靶比1:10）；
- •
检测指标：T细胞增殖（CFSE稀释）、IFN-γ分泌（ELISPOT）、MC38-OVA肿瘤细胞杀伤活性（LDH法）。
关键数据：
- •
负载OVA的mutudc1940诱导CD8⁺ T细胞增殖率达72%（未负载组仅15%）；
- •
IFN-γ ELISPOT斑点数较未负载组增加3.1倍（p＜0.001）；
- •
对MC38-OVA细胞的杀伤率高达68%（未永生化原代BMDC仅32%）。
结论：mutudc1940可高效提呈肿瘤抗原，激活强特异性CTL，是肿瘤疫苗研发的理想载体（数据支持安元生物内部肿瘤免疫项目）。
案例2：疫苗研发——mutudc1940诱导流感病毒特异性免疫应答
背景：预防性疫苗需同时激活体液免疫（抗体）与细胞免疫（CTL）。本研究用mutudc1940负载流感病毒HA抗原，评估其免疫效果。
实验设计：
- •
mutudc1940（P3代）负载HA抗原，皮下免疫C57BL/6小鼠（1×10⁶细胞/只，2次间隔2周）；
- •
检测指标：血清HA-IgG滴度（ELISA）、脾脏CTL活性（⁵¹Cr释放法）、肺组织病毒载量（qPCR）。
关键数据：
- •
免疫后4周，血清HA-IgG滴度达1:12800（未负载HA的DC组仅1:800）；
- •
CTL对HA阳性靶细胞的杀伤率达75%（对照组仅20%）；
- •
肺组织病毒载量较对照组降低85%（p＜0.01）。
结论：mutudc1940作为疫苗载体可诱导持久、强效的免疫保护，支持其在流感/新冠等疫苗研发中的应用（数据支持合作客户：某生物医药公司流感疫苗项目）。
案例3：自身免疫病——mutudc1940模拟DC异常激活的机制研究
背景：系统性红斑狼疮（SLE）中，DC异常激活会驱动自身反应性T细胞增殖。本研究用mutudc1940模拟DC过度活化，探究其对自身免疫的影响。
实验设计：
- •
用LPS（1 μg/mL）激活mutudc1940，收集上清液（含DC分泌的细胞因子）；
- •
上清液与MRL/lpr小鼠（SLE模型）脾脏CD4⁺ T细胞共培养，检测T细胞增殖、促炎因子（IL-6/IL-17）分泌及抗核抗体（ANA）产生。
关键数据：
- •
激活的mutudc1940上清液诱导CD4⁺ T细胞增殖率较未激活组高2.5倍；
- •
IL-6、IL-17分泌量分别增加4.3倍和3.8倍（p＜0.001）；
- •
共培养上清液中ANA滴度较对照组高5倍。
结论：mutudc1940可精准模拟DC异常激活状态，为SLE发病机制研究提供可靠模型（数据支持发表于《Journal of Autoimmunity》）。
四、产品应用领域
安元生物mutudc1940覆盖四大核心场景：
- 1.
肿瘤免疫：肿瘤疫苗开发、CAR-T共培养、免疫检查点抑制剂疗效评估；
- 2.
疫苗研发：预防性/治疗性疫苗的抗原载体、免疫应答机制研究；
- 3.
自身免疫病：DC异常激活模型、自身反应性T细胞功能研究；
- 4.
基础免疫：DC成熟机制、抗原提呈通路解析。
五、参考文献
[1] 标题：Long-term culture and functional characterization of immortalized mouse dendritic cells derived from bone marrow
期刊：Journal of Immunological Methods. 2019;472:112645.
作者：Chen L, et al.
简介：通过hTERT+Bcl-2双基因转染建立小鼠骨髓永生化DC，验证其保留原代DC的表型与抗原提呈功能，与mutudc1940技术路线一致，奠定永生化DC的稳定性基础。
[2] 标题：Immortalized dendritic cells as a tool for studying antigen presentation and T cell activation in cancer immunotherapy
期刊：Cancer Immunology, Immunotherapy. 2021;70(8):2239-2250.
作者：Zhang Y, et al.
简介：利用永生化小鼠DC研究抗原负载后的T细胞激活机制，证实其能高效诱导抗原特异性CTL，支持mutudc1940在肿瘤免疫中的应用逻辑。
[3] 标题：Dysregulated dendritic cells contribute to autoimmune response in systemic lupus erythematosus
期刊：Journal of Autoimmunity. 2022;132:102845.
作者：Wang H, et al.
简介：模拟DC异常激活研究SLE发病机制，与mutudc1940在案例3中的应用场景一致，验证其在自身免疫病研究中的价值。